鑒別
標準培養(yǎng)基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。
標準培養(yǎng)基的試驗步驟
1)制備細胞懸液
A取長成致密單層的細胞種子,將原細胞培養(yǎng)液從細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)吸出,用適量平衡鹽溶液洗細胞一次,棄洗液(去除死細胞)。
B向細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)加入胰蛋白酶溶液1ml,消化一定時間,在顯微鏡下觀察,當(dāng)細胞變圓接近脫壁時,將胰蛋白酶溶液倒掉。
C根據(jù)細胞數(shù)量加入一定量細胞培養(yǎng)液,用吸管吹打,使細胞脫壁制成細胞懸液A。
2)細胞培養(yǎng)
A吸取一定量的細胞懸液A,加到細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。
B向細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)加至10ml含體積分數(shù)為3%或10%的小牛血清的細胞培養(yǎng)液,使細胞接種數(shù)量為5×104細胞/ml。
C將細胞培養(yǎng)瓶送入培養(yǎng)箱,在(37±1)℃溫度條件及(5±0.1)%二氧化碳條件下進行培養(yǎng)。
D培養(yǎng)72h,觀察細胞形態(tài),按照2.7.1.4步驟1)方法制備細胞懸液,進行活細胞計數(shù)。
E培養(yǎng)72h后,更換不含牛血清的細胞培養(yǎng)液10ml,繼續(xù)培養(yǎng)48h,觀察細胞形態(tài),按照2.7.1.4試驗步驟1)方法制備細胞懸液,進行活細胞計數(shù)。